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讓我們一起來看看透析袋的選擇和使用方法

  • 發(fā)布日期:2022-04-19      瀏覽次數(shù):1206
    •   讓我們一起來看看透析袋的選擇和使用方法
        透析技術(shù)自Thomas Graham 于1861年發(fā)明到現(xiàn)在已有一百多年的歷史,它已成為生物化學(xué)實驗室簡便,常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中,去除鹽、少量有機溶劑、小分子雜質(zhì)、樣品濃縮和改變微量樣品的緩沖系統(tǒng)等都要用到透析技術(shù)。
        生物樣品的透析只需使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子等物質(zhì)不斷擴散透析到袋外,直到袋內(nèi)、外兩邊的濃度達(dá)到平衡。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
        透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的溶質(zhì)濃度梯度形成的。透析的速度同欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度、膜的面積和溫度成正比,與膜的厚度成反比。升高溫度可加快透析速度。為大限度地保持生物大分子的活性,通常采用4℃透析。
        透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的多的還是用纖維素制成的透析膜。
        商品化的透析袋可制成管狀,其扁平寬度為6~50 mm不等。為防干裂,出廠前一般都經(jīng)10%的甘油處理,透析袋中含有微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去。新購進(jìn)的透析袋必須經(jīng)過處理才能使用。50%的乙醇煮沸1小時,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,再用蒸餾水沖洗后即可使用。實驗證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。使用后的透析袋洗凈后可存于蒸餾水中,置4℃保存。若長時間不用,可加入適量的疊氮鈉(NaN2),以抑制微生物的生長。干的透析袋彎折時易出現(xiàn)裂口,用時必須仔細(xì)檢查。
        經(jīng)過處理的透析袋,使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿蒸餾水,用手指稍加壓,檢查是否漏液,確證無誤后,再用蒸餾水洗凈,方可裝入待透析樣品。裝入樣品時通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,因透析樣品中的小分子濃度較大,袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析經(jīng)過一夜時,體積增加是正常的,有時甚至可達(dá)50%以上。透析可以使用燒杯、量筒和塑料桶等容器,容器的大小以20-50:1為宜。少量樣品溶液的透析,可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
        通常為了把握透析效果,有時需要對透析液中欲去除的小分子殘留物進(jìn)行分析,如甘氨酸、二甲基甲酰胺、甲醛、戊二醛、碳酸根、偶聯(lián)劑等。小分子殘留物的檢測分析方法很多,如 (NH4)2SO4可用1%的BaCl2檢查,NaCl、KCl等可用1%的AgNO3 檢查。有些檢測方法比較復(fù)雜,或需要一定的條件,如確有必要可參考相關(guān)文獻(xiàn)資料。
        為了加快透析速度,提高透析效率,除及時更換透析液外,還可使用磁力攪拌,還可以使用各種透析裝置。

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